miércoles, 29 de octubre de 2014
jueves, 23 de octubre de 2014
lunes, 20 de octubre de 2014
Halos de inhibición
Los Halos de inhibición zona alrededor de un disco de antibiótico en un antibiograma
en el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de agar inoculada
con el germen. Es una medida de la potencia del antibiótico frente al germen, Más
simple, es para medir la resistencia que tiene un germen a un antibiótico a través
de un antibiograma
Lectura de halos
Los diámetros de la zona de inhibición se miden con una regla, con un calibrador o con un lector automático.En el caso en que haya colonias individuales dentro de loshalos, éstas deberán subcultivarse, confirmar su pureza y repetir la prueba de sensibilidad si fuera necesario.
Leer las placas de MH por el reverso, contra un fondo negro iluminado con luz
reflejada. Leer las placas de MH-F por el frente, sin la tapa e iluminadas con luz reflejada.
Lectura de Halos: excepciones
Interpretación de los halos
Confirmar que los diámetros de inhibición para las cepas control están dentro de los rangos aceptables antes de interpretar la prueba de sensibilidad.
Los diámetros de los halos (ajustados al milímetro) se interpretan dentro de las categorías de sensibilidad (S, I y R) .
.jpg)
sábado, 18 de octubre de 2014
NMP (Numero Mas Probable
EL METODO DE NUMERO
MAS PROBABLE (NMP) (Most probable number - MPN - en inglés), también conocido
como el método de los ceros de Poissones
Una forma de obtener datos cuantitativos en
concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia
positiva/negativa.
Es una estrategia eficiente
de estimación de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluación
cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa en la
determinación de presencia o ausencia (pos +o neg) en réplicas de diluciones consecutivas
de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u
otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad
de poder reconocer un atributo particular de la población(es) en el medio de
crecimiento a utilizarse.
El estimado de
densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones
seriadas y el uso de una tabla probabilística.
Algunas de las
ventajas del NMP son:
- . la capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el método de infección de plantas,
- 2. provee una recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados,
- 3. Determina sólo organismos vivos y activos metabólicamente, y
- 4. suele ser más rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros.
Se utiliza para contar
microorganismos que son difíciles de cultivar en medio sólido. También se usa
para determinar el número de células de un cultivo mixtoque pueden crecer en un
medio líquido determinado. Por ejemplo, puede emplearse para determinar la
contaminación del agua potable, determinando el número de bacterias que pueden
crecer en un medio que contiene lactosa. Estasbacterias probablemente sean
Escherichia Coli provenientes de aguas residuales contaminadas, y la presencia
de E. Coli en el agua potable es una prueba presuntiva de contaminación.
Referencias
http://www.uprm.edu/biology/profs/massol/manual/p4-nmpenumeracion.pdf
https://www.scribd.com/doc/97396490/El-Numero-Mas-Probable
viernes, 17 de octubre de 2014
Crecimiento en tubo
Según el tipo de respiración:
Se puede identificar el tipo de respiración de los microorganismos, mediante el tipo de crecimiento en un medio líquido de cultivo:
3. Facultativo
5. Aerotolerante (anaerobio)
- Las bacterias
facultativas son bacterias que
pueden adaptarse para crecer y metabolizar tanto en presencia como en
ausencia de oxígeno, por lo que también se les llama anaerobias
facultativas o aerobias facultativas. Pueden
desarrollar un metabolismo tanto respiratorio usando el oxígeno como
fermentativo en ausencia de oxígeno. Las bacterias anaerobias facultativas
pueden obtener energía en ausencia de oxígeno, pero el oxígeno no les es
tóxico.
- Las
proteobacterias (Proteobacteria) son uno de los principales
grupos de bacterias. Incluyen una gran variedad de patógenos, las más importantes
son: Escherichia, Salmonella, Vibrio, Helicobacter, Neisseria gonorrhoeae y muchos
otros.
- Otro
grupo de bacterias facultativas son de vida libre, e incluyen muchas de
las bacterias responsables de la fijación del nitrógeno. El grupo se
establece principalmente en términos de secuencias de ARN, y se denominan
así en honor al dios griego Proteus,
el cual podía cambiar de forma, dada la gran diversidad de formas
encontradas en ellas.
Todas las proteobacterias son Gram negativas, con una pared celular formada
principalmente de lipopolisacáridos, su morfología es muy variable, desde
bacilos, hasta cocos simples hasta géneros con prosteca, y más e incluso
cuerpos fructíferos.
Muchas de estas bacterias se mueven utilizando flagelos, pero algunas lo
pueden hacer por deslizamiento bacterial. Entre estas se encuentran lasmixobacterias,
un grupo único de bacterias que pueden agruparse para formar cuerpos
fructíferos.
Tienen también una gran variedad de tipos de metabolismo. La mayoría de
las proteobacterias son anaerobias, pero hay muchas excepciones. Las
mitocondrias que permiten respirar a las células eucariotas se derivan de proteobacterias,
probablemente similares a las rickettsias.
La nutrición es usualmente heterótrofa, pero hay dos grupos que realizan
la fotosíntesis, denominadas bacterias púrpuras. Las bacterias púrpuras del
azufre usan azufre o sulfuro de hidrógeno como donante de electrones, mientras
que las bacterias púrpuras no del azufre utilizan hidrógeno. Puesto que esta
función no es realizada por el agua, como es común en plantas y cyanobacterias,
no se produce oxígeno.1
Existe un subgrupo de bacterias, denominadas de aerotolrantes como las
del ácido láctico, estas, aunque pueden crecer en presencia de oxígeno, no
pueden utilizarlo, sino que obtienen energía exclusivamente por fermentación.
jueves, 16 de octubre de 2014
Dilucion bacteriana
TÉCNICA DE RECUENTO POR DILUCIÓN.
En diversos estudios microbiológicos
(como análisis de alimentos, de agua de bebida, de productos farmacéuticos o
del medioambiente entre otros), se requiere conocer el número de
microorganismos presentes en un material con objeto de determinar su calidad.
El procedimiento es esencialmente el mismo que para la medida del crecimiento
de las poblaciones de bacterias.
El
crecimiento de poblaciones microbianas puede determinarse mediante métodos de
medida de la masa total celular, que generalmente es directamente proporcional
al número de células, (métodos de determinación del peso, de la actividad del
cultivo o métodos turbidimétricos) o por la determinación del número de
células.
En este caso solo se habara sobre la Técnica de Recuento por Dilución.
Mediante el uso de esta técnica de simple ejecución y fácil
interpretación, se pueden evaluar diferentes grupos bacterianos según el
medio de cultivo que contenga el frasco.
Es aplicable para evaluar bacterias heterotróficas, aerobias totales
(BAT), bacterias reductoras de sulfato (BRS), anaerobias heterotróficas
totales (BAnT), etc.
Esta técnica está recomendada por el Instituto Americano del Petróleo (API) para evaluar calidad biológica en aguas de inyección en recuperación secundaria y también es ampliamente usada en evaluación de problemas microbiológicos en aguas de refrigeración.
Procedimiento.
La técnica de dilución por extinción consiste en inocular una serie de frascos tipo antibiótico que contienen 9 ml del medio de cultivo apropiado según el tipo de bacteria que se quiera evaluar.
Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa descartable, estéril, de 1 o 2 ml de capacidad.
Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y se retira 1 ml que se inocula en el 2° frasco.
Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N° 2, previamente agitado, y se inocula el frasco N° 3 y así sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco.
Esta técnica está recomendada por el Instituto Americano del Petróleo (API) para evaluar calidad biológica en aguas de inyección en recuperación secundaria y también es ampliamente usada en evaluación de problemas microbiológicos en aguas de refrigeración.
Procedimiento.
La técnica de dilución por extinción consiste en inocular una serie de frascos tipo antibiótico que contienen 9 ml del medio de cultivo apropiado según el tipo de bacteria que se quiera evaluar.
Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa descartable, estéril, de 1 o 2 ml de capacidad.
Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y se retira 1 ml que se inocula en el 2° frasco.
Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N° 2, previamente agitado, y se inocula el frasco N° 3 y así sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco.
Si no existe información previa sobre cantidad de bacterias/mL de la muestra suelen sembrarse 6 frascos.
La manifestación de crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de cultivo que se compara por transparencia con un frasco sin inocular en el caso de bacterias aerobias totales y bacterias anaerobias totales; en el caso de bacterias reductoras de sulfatos se debe observar un ennegrecimiento del frasco.
Una vez inoculados los frascos y rotulados convenientemente, se incuban durante 7 días (BAT, BAT-RF, MFT) o 14 días (BPA) en estufa de cultivo a ±5ºC respecto de la temperatura del agua muestreada, efectuando lecturas diarias para observar aquellos frascos que manifiestan desarrollo positivo. Para el caso de los medios BRS y BRH, el plazo de lectura es de 28 días máximo, realizando también lecturas periódicas..
Cálculos de densidad bacteriana.
Se tienen en cuenta los frascos que manifiesten alguna modificación como consecuencia del crecimiento bacteriano; esta modificación puede ser turbidez, cambio de color, ennegrecimiento, etc.
Por ejemplo: si se usó el medio BAT-RF y se observa turbidez y/o cambio de color hasta el frasco N° 4 el resultado sería 1000-10000 bact/mL o exponencialmente 103-104 bact/mL.. Habitualmente se informa 104 bact/mL.
La manifestación de crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de cultivo que se compara por transparencia con un frasco sin inocular en el caso de bacterias aerobias totales y bacterias anaerobias totales; en el caso de bacterias reductoras de sulfatos se debe observar un ennegrecimiento del frasco.
Una vez inoculados los frascos y rotulados convenientemente, se incuban durante 7 días (BAT, BAT-RF, MFT) o 14 días (BPA) en estufa de cultivo a ±5ºC respecto de la temperatura del agua muestreada, efectuando lecturas diarias para observar aquellos frascos que manifiestan desarrollo positivo. Para el caso de los medios BRS y BRH, el plazo de lectura es de 28 días máximo, realizando también lecturas periódicas..
Cálculos de densidad bacteriana.
Se tienen en cuenta los frascos que manifiesten alguna modificación como consecuencia del crecimiento bacteriano; esta modificación puede ser turbidez, cambio de color, ennegrecimiento, etc.
Por ejemplo: si se usó el medio BAT-RF y se observa turbidez y/o cambio de color hasta el frasco N° 4 el resultado sería 1000-10000 bact/mL o exponencialmente 103-104 bact/mL.. Habitualmente se informa 104 bact/mL.
Problemas comunes en la interpretación del crecimiento bacteriano cuando se utiliza la técnica de dilución por extinción.
Hay una variedad de acontecimientos que interfieren con la interpretación de resultados obtenidos utilizando las diluciones seriadas. Algunos de los mas comunes son:
· Todos los frascos muestran crecimiento.
Si esto sucede, no es posible estimar la población, por ejemplo si en una serie de 6 frascos inoculados todos se manifiestan positivos se debe informar:106 bact/mL. Para el próximo análisis de esa muestra habría que considerar el empleo de 8 o 9 frascos.
· Un frasco no denota crecimiento y el resto sí.
Algunas veces uno de los frascos permanece sin cambios mientras que los ubicados anterior y posteriormente en la serie inoculada muestran positividad. Es decir, hay un “salto” en los frascos positivos. Este “salto” debe ser anotado y se informará la concentración bacteriana correspondiente al frasco de mayor numeración que resultó positivo. Por ejemplo: El crecimiento positivo se observa en los frascos 1, 2 y 4 mientras los frascos 3, 5 y 6 permanecen sin modificaciones, todo después de incubar a la temperatura y tiempo incubado. Hay varias explicaciones posibles para esto, incluyendo una contaminación accidental del frasco 4. Por lo tanto, nunca se puede saber que ocurrió realmente y hay que proceder de la forma más simple ante una situación dudosa.
En el ejemplo anterior, si se confía razonablemente en que los frascos fueron rotulados apropiadamente con su número de orden, el informe será 104 bact/mL anotando el frasco que “saltó”.
· Frascos que se manifiestan positivo inmediatamente.
Si el primer frasco con un medio de cultivo para BRS se ennegrece dentro de las 2 horas de haber sido inoculado con 1 mL de agua muestra, este ennegrecimiento no es producto del crecimiento bacteriano dentro del frasco; el color negro es debido al SFe proveniente de altos niveles de SH2 en la muestra de agua que reaccionó con el Fe disuelto en el caldo de cultivo. En estos casos se pueden seguir dos cursos de acción:
Hay una variedad de acontecimientos que interfieren con la interpretación de resultados obtenidos utilizando las diluciones seriadas. Algunos de los mas comunes son:
· Todos los frascos muestran crecimiento.
Si esto sucede, no es posible estimar la población, por ejemplo si en una serie de 6 frascos inoculados todos se manifiestan positivos se debe informar:106 bact/mL. Para el próximo análisis de esa muestra habría que considerar el empleo de 8 o 9 frascos.
· Un frasco no denota crecimiento y el resto sí.
Algunas veces uno de los frascos permanece sin cambios mientras que los ubicados anterior y posteriormente en la serie inoculada muestran positividad. Es decir, hay un “salto” en los frascos positivos. Este “salto” debe ser anotado y se informará la concentración bacteriana correspondiente al frasco de mayor numeración que resultó positivo. Por ejemplo: El crecimiento positivo se observa en los frascos 1, 2 y 4 mientras los frascos 3, 5 y 6 permanecen sin modificaciones, todo después de incubar a la temperatura y tiempo incubado. Hay varias explicaciones posibles para esto, incluyendo una contaminación accidental del frasco 4. Por lo tanto, nunca se puede saber que ocurrió realmente y hay que proceder de la forma más simple ante una situación dudosa.
En el ejemplo anterior, si se confía razonablemente en que los frascos fueron rotulados apropiadamente con su número de orden, el informe será 104 bact/mL anotando el frasco que “saltó”.
· Frascos que se manifiestan positivo inmediatamente.
Si el primer frasco con un medio de cultivo para BRS se ennegrece dentro de las 2 horas de haber sido inoculado con 1 mL de agua muestra, este ennegrecimiento no es producto del crecimiento bacteriano dentro del frasco; el color negro es debido al SFe proveniente de altos niveles de SH2 en la muestra de agua que reaccionó con el Fe disuelto en el caldo de cultivo. En estos casos se pueden seguir dos cursos de acción:
1) Proceder con las diluciones seriadas. Los frascos 2 a 6
permanecerán generalmente sin cambios y pueden ser usados para detectar
el crecimiento bacteriano incubándolos a temperatura y tiempo adecuado y
observando ennegrecimiento en los mismos transcurrido el tiempo de
incubación.
2) Colectar por lo menos 50 mL de agua en un frasco estéril y
agregarle una tableta de Alka-Seltzer que puede despojar la mayoría del
SH2 de la muestra. Cuando la tableta cesa de burbujear, retirar 1 mL de
agua con jeringa estéril y llevar a cabo el procedimiento habitual de
las diluciones seriadas.
Bibliografía:
miércoles, 15 de octubre de 2014
Curva de Crecimiento
La curva del crecimiento bacteriano resulta de la representación gráfica de la determinación periódica del número de células viables por mililitro que existen en un líquido inoculado con células microbianas provenientes de un cultivo que ha crecido previamente hasta la saturación.
En la figura se ilustra una curva de crecimiento de una población bacteriana. Esta curva se
divide en cuatro fases denominadas fase de latencia, fase exponencial o fase logarítmica, fase estacionaria y fase de muerte.
Cuando una población bacteriana es inoculada en medio fresco, el crecimiento usualmente no
comienza de inmediato sino después de un tiempo llamado de latencia, que puede ser corto
o largo dependiendo de las condiciones.s
La fase de latencia representa un periodo de transición para los microorganismos cuando son
transferidos a una nueva condición. En esta fase se producen las enzimas necesarias para
que ellos puedan crecer en un nuevo medio ambiente.
En esta fase no hay incremento en el número de células, pero hay gran actividad metabólica,
aumento en el tamaño individual de las células, en el contenido proteico, ADN y peso seco de
las células.
Si un cultivo que está creciendo en fase exponencial es inoculado al mismo medio de cultivo bajo las mismas condiciones de crecimiento, no se observa fase de latencia y el crecimiento
exponencial sigue a la misma velocidad. Si el inóculo se toma de un cultivo viejo (fase estacionaria) y se inocula en el mismo medio, generalmente se presenta la fase de latencia esto se
debe a que las células generalmente agotan una serie de coenzimas esenciales u otros constuyentes celulares y se requiere cierto tiempo para su resíntesis.
También se latencia cuando el inóculo está formado por células que han sido dañadas pero no muertas, bien sea por tratamiento con calor, radiaciones o sustancias químicas, puesto que requieren reparar dicho daño.
En el caso de que una población se transfiera de un medio de cultivo rico a un medio pobre,
se observa latencia puesto que es necesario que las células para poder seguir creciendo
tengan una serie de enzimas para poder sintetizar algunos metabolitos esenciales que no
están presentes en el medio.
En la figura se ilustra una curva de crecimiento de una población bacteriana. Esta curva se
divide en cuatro fases denominadas fase de latencia, fase exponencial o fase logarítmica, fase estacionaria y fase de muerte.
Fase de Latencia
Cuando una población bacteriana es inoculada en medio fresco, el crecimiento usualmente no comienza de inmediato sino después de un tiempo llamado de latencia, que puede ser corto
o largo dependiendo de las condiciones.s
La fase de latencia representa un periodo de transición para los microorganismos cuando son
transferidos a una nueva condición. En esta fase se producen las enzimas necesarias para
que ellos puedan crecer en un nuevo medio ambiente.
En esta fase no hay incremento en el número de células, pero hay gran actividad metabólica,
aumento en el tamaño individual de las células, en el contenido proteico, ADN y peso seco de
las células.
Si un cultivo que está creciendo en fase exponencial es inoculado al mismo medio de cultivo bajo las mismas condiciones de crecimiento, no se observa fase de latencia y el crecimiento
exponencial sigue a la misma velocidad. Si el inóculo se toma de un cultivo viejo (fase estacionaria) y se inocula en el mismo medio, generalmente se presenta la fase de latencia esto se
debe a que las células generalmente agotan una serie de coenzimas esenciales u otros constuyentes celulares y se requiere cierto tiempo para su resíntesis.
También se latencia cuando el inóculo está formado por células que han sido dañadas pero no muertas, bien sea por tratamiento con calor, radiaciones o sustancias químicas, puesto que requieren reparar dicho daño.
En el caso de que una población se transfiera de un medio de cultivo rico a un medio pobre,
se observa latencia puesto que es necesario que las células para poder seguir creciendo
tengan una serie de enzimas para poder sintetizar algunos metabolitos esenciales que no
están presentes en el medio.
Fase exponencial o Logarítmica
Es el período de la curva de crecimiento en el cual el microorganismo crece exponencialmente, es decir que cada vez que pasa un tiempo de generación la población se duplica. Bajo condiciones apropiadas la velocidad de crecimiento es máxima. Las condiciones ambientales (temperatura, composición del medio de cultivo, etc.) afectan a la velocidad de crecimiento exponencial.
Fase Estacionaria
En cultivos en recipientes cerrados una población no puede crecer indefinidamente en forma exponencial. Las limitaciones del crecimiento ocurren ya sea por agotamiento de algún nutriente esencial, por acumulación de productos tóxicos, porque se alcance un número de células elevado para el espacio disponible o por una combinación de las causas anteriores. Este periodo durante el cual cesa el crecimiento se conoce como fase estacionaria.
Fase de Muerte
Si la incubación continúa después de que una población microbiana alcanza la fase estacionaria, las células pueden seguir vivas y continuar metabolizando, pero va a comenzar una disminución progresiva en el número de células viables y cuando esto ocurre se dice que la población ha entrado en fase de muerte.
martes, 14 de octubre de 2014
Cultivo puro
Cultivos puros: son aquellos que contienen un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola célula
Características de los cultivos puros
- Las colonias deben ser iguales en forma, tamaño y color.
- Que no existan formas inhibidas.
- Al microscopio deben tener un aspecto común.
- Tiene que tener iguales propiedades tintoriales
- Deben ser bioquímicamente y fisiológicamente iguales..
- Una regla importante es no coger nunca de la primera colonia.
Técnica de siembra
La técnica para el aislamiento comienza preparando un inóculo de siembra, que es la deposición de una pequeña porción de la muestra en el medio o en los medios de cultivo adecuado, en función de las especies microbianas que se espera encontrar.La siembra para inoculación y la siembra para aislamiento.
- Siembra para inoculación: la inoculación consiste en tomar una pequeña porción de la muestra y diluirla para dispersarla y que crezca con más facilidad en el medio de cultivo. Se puede inocular en medio líquido o en medio sólido.
- Siembra para aislamiento: la finalidad de este tipo de siembras es la de obtener cultivos puros. Se siembra en placa de Petri que contienen medios de cultivo sólidos.
Existen varios tipos de siembras para aislamiento:Siembra en estría o zig-zag, siembra por estría múltiple, siembra de los cuatro cuadrantes, siembra de los tres giros.
Metidos para obtener cultivos puros
- Método de siembra para aislamiento por agotamiento o en estría
Materiales
- Placa petri con medio de cultivo
- Muestra (sólida o líquida)
- Asa de siembra de platino
Con el asa estéril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensión anterior en otra dirección. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender parte de la segunda extensión en otra dirección. Esterilizamos y repetimos la operación. Incubamos a 37 º durante 24 horas y, en la primera zona, habrá un amasijo de células. En la segunda, parte de la primera zona estará mejor extendida, y en la tercera y en la 4ª mejor aún. Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro.
Método de siembra para aislamiento por diluciones sucesivas
Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas células que, tras inocularse en un medio de cultivo, generen colonias aisladas.
- Metodología: ahora tomamos 0.1 ml de cada tubo y lo depositamos en una placa petri con medio de cultivo. Con un asa de vidrio se extiende esa cantidad sobre la placa, e incubams a 37 ºC durante 24 horas.
En la primera dilución habrá un amasijo de colonias. En la siguiente habrá diez veces menos número de colonias, y así sucesivamente hasta conseguir colonias aisladas. Este método nos permite calcular el número de microorganismos viables que existen en la muestra que estamos analizando: N=C · 1/D · 1/i
donde:
N es el número de microorganismos presentes en la muestra
C es el número de colonias contadas UFC (unidades formadoras de colonias)
D es la dilución
I es el inóculo
Debe haber entre 30 y 300 colonias. Si hay menos, no es significativo (puede tratarse de una contaminación) y, si hay más, no están aisladas.
Técnica de cultivo por enrequesimiento
Consiste en ajustar las condiciones de cultivo para seleccionar el microorganismo que nos interesa aislar. Ejemplo: nos interesa aislar bacterias fotoautótrofas. Tomamos un matraz con agua y sales y lo incubamos a la luz, de manera que crezcan las bacterias fotoautótrofas. Ejemplo: queremos aislar bacterias quimiolitótrofas del azufre; ponemos azufre, CO2 como fuente de carbono (disuelto en agua) e incubamos en la oscuridad para eliminar fotoautótrofos. Para incubar enterobactrias como enterobacter hay que incubar a 37º, mientras que para incubar otra enterobacteria, E. Coli, hay que incubar a 45º.
Conservación de cultivos puros
- Almacenamiento a temperaturas bajas. Ponemos las bacterias con glicerol al 20 - 50% a -70º y podemos mantenerlas así durante años y décadas.
- Liofilización: es un método más eficaz. En un vial de liofilización ponemos leche desnatada y las bacterias, lo congelamos, lo llevamos al liofilizador y lo sometemos al proceso de liofilización. La liofilización es una evaporación por condensación. Se basa en el punto triple del agua; podemos pasar de sólido a gas. El agua se evapora y queda un polvillo formado por la leche y las bacterias. Cerramos el bote y podemos almacenar el cultivo durante décadas.
Mantenimiento
- Debemos transferir periódicamente, ya que los tubos de agar se secan, se evapora el agua.
- Se debe cubrir con parafina, con lo cual la transferencia se puede hacer más tarde, disminuye el metabolismo y tardan en envejecer.
- Se disminuye la temperatura, congelamos las células. Para proteger las células y que no se formen cristales que las dañen se usa el glicerol
- La liofilización es la sublimación a alto vacío de las muestras congeladas con rapidez.
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